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使用巴氏染色液后結果不理想的原因有哪些?
發布時間:2019-11-13   點擊次數:1623次
   巴氏染色液染片胞漿、胞核、胞膜清晰、易辨,紅藍相間。進口原料配制,染液的穩定性好,無嗅、無味、無刺激、吸附性強、不脫色,對涂片無特殊要求。研制的改良巴氏染液染色全程只需要5分鐘,改良巴氏染液染色全程只需要3分鐘,且步驟簡單,只需初染—復染—增色三步,省時、準確、操作簡便,即來即檢,立等可取檢查結果,無需梯度酒精脫水,二甲苯透明,可直接封片保存。
  
  檢驗原理:
  巴氏染色液中有蘇木素、橘黃、伊紅、俾士麥棕及亮綠等染料,其中蘇木素能與細胞核的核酸結合而顯紫藍色,其他染料可以與細胞漿中不同的化學成分結合而顯顏色。
 

  
  使用方法:
  
  1.將涂片置于95%乙醇中固定15分鐘以上;
  
  2.依次浸入80%、50%乙醇中各30秒,水洗1~2分鐘;
  
  3.浸入蘇木精染液中3~5分鐘,水洗1~2分鐘;
  
  4.浸入鹽酸酒精分化液中分化數秒,水洗1~2分鐘;
  
  5.浸入返藍液中數秒,水洗1~2分鐘;
  
  6.置于95%乙醇中漂洗,水洗甩干;
  
  7.浸入橘黃G染液染中1~3分鐘;95%乙醇漂洗、95%乙醇漂洗、100%乙醇漂洗各一次,時間各10~20秒;
  
  8.浸入EA36染液(或EA50染液)中染色2~5分鐘,95%乙醇漂洗、95%乙醇漂洗、100%乙醇漂洗各一次,時間各10~20秒;
  
  9.浸入浸蠟脫蠟透明液中2分鐘;
  
  10.中性樹膠封固;
  
  11.鏡檢。
  
  染色結果:
  
  上皮細胞:胞核呈紫藍色,核仁紅色;胞質受色隨分化程度和細胞類型不同可染成藍綠色、粉紅色或桔黃色;紅細胞:鮮紅色或橙紅色。白細胞:胞核藍紫色,胞質淡藍或淡綠色;粘液:淡藍或粉紅色。
  
  使用巴氏染色液染色結果不理想原因分析:
  
  1、細胞核著色不佳
  
  (1)細胞核著色過淺:
  
  鹽酸分化時間過長或蘇木素染液時間過長。需要縮短分化時間或延長堿化時間;每日加入少量新鮮蘇木素染液或重新配制蘇木素液。
  
  在固定之前制片干燥。所以對巴氏染色的制片需要嚴格遵守濕固定的原則。
  
  自來水的PH值偏酸性。使用堿性溶液。
  
  (2)細胞核著色過深:
  
  鹽酸溶液濃度不夠。適當加入幾滴鹽酸以增加濃度。
  
  制片用高于95%以上濃度的酒精固定后可以出現染色過深。應用95%酒精固定。
  
  2、細胞漿著色不佳
  
  (1)如果全片內胞漿都淡染,則需要延長染色時間或更換新液。
  
  (2)如果胞漿不分色,均為淺紅色。制片在固定前干燥或制片被有大量球菌樣細菌影響胞漿染色。此情況可以適當增加染色時間能夠部分糾正不分色狀況。
  
  (3)胞漿染成灰色或紫色,是由于蘇木素染色時間過長或鹽酸分化不佳。經過褪色后重新蘇木素可以糾正。
  
  (4)由于標本的不同,同樣配方的EA染液可造成偏藍、偏綠和偏紅,對不同的標本應該使用不同的EA染液。一般認為,EA36和EA50用于婦科標本,而EA65或改良EA用于非婦科標本。
  
  (5)胞漿不分色的另一重要原因是由于EA染液的PH值不恰當所致。如染色為紅色,可以加少許磷鎢酸溶液糾正;如染色均為藍色或綠色,可以加少許飽和碳酸鋰溶液糾正。對于改良EA染液,每100ml染液加入2ml冰醋酸后染色效果更佳;染液使用更持久。
  

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