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使用細菌染色液的一點心得體會,供參考
發布時間:2019-05-07   點擊次數:1164次
細菌染色液產品說明:
細菌鞭毛為細菌的運動器官,主要成分是蛋白質。其形態細長,直徑約10-20nm,需用電子顯微鏡才
能觀察到。所以鞭毛染色時先經媒染劑處理,使鞭毛增粗,然后再進行染色,則可在普通光學顯微鏡下觀
察。
 
操作步驟:
取鞭毛染色液A 液9 份和 B 液1 份混合配成工作液,現用現配,建議過濾后使用。
(1) 細菌標本制備:變形桿菌接種于瓊脂平板,37℃培養18-24h,仔細從菌膜遷徙生長的邊緣處挑取
菌體少許,輕輕放入無菌蒸餾水試管中,經數分鐘使其自行分散,再37℃放置約10min。
(2) 涂片:取上述菌液一接種環,輕輕滴于載玻片上,使成薄膜。涂抹時接種環隨水滴移動,切勿與
玻片相磨,以免鞭毛脫落。
(3) 染色:涂片自然干燥(勿用火焰固定)后,滴加鞭毛染色液數滴覆蓋菌膜,染色5-10min ,水洗、
吸干、鏡檢。
 
【預期用途】:用于抗酸性細菌的染色。
 
【檢驗原理】:由于抗酸性細菌具有抗酸性,在被含石炭酸的復紅液染色后結合牢固,不易被酸性脫色液脫色,終染色為紅色。而非抗酸性細菌在被含石炭酸的復紅液染色后結合不牢,容易被酸性脫色液脫色,經復染后終顯微鏡下顯示為藍色或無色。
 
【儲存條件及有效期】:15℃~30℃,避光。有效期365天。
 
【適用儀器】:光學顯微鏡
 
【樣本要求】:選擇能反映活動病程有臨床價值的標本或培養物。
 
【檢驗方法】:
 
a) 將標本制成薄涂片,或者以接種環挑取新鮮菌落與生理鹽水充分混勻制成薄涂片(若為液體菌液,挑取2~3環直接涂抹即可),自然干燥,火焰固定,滴加石炭酸復紅液覆蓋涂片染色5~8分鐘,水洗;
 
b) 滴加硫酸美蘭液覆蓋涂片染色,脫色5~8分鐘,水洗;
 
c) 待涼干后,顯微鏡下油鏡檢查。背景淡藍色或無色。
 
【參考值(參考范圍)】:陽性為光學顯微鏡油鏡(10×100)下見有紅色桿狀菌,反之為陰性。
 
【檢驗結果的解釋】:陽性為光學顯微鏡油鏡(10×100)下見有紅色桿狀菌,反之為陰性。
 
【檢驗方法的局限性】:對陽性結果不能區分是強抗酸菌還是弱抗酸菌,需要用強抗酸染色液染色做對比予以確認。
 
細菌染色液使用體會和說明:
 
1、革蘭氏染色成敗的關鍵是酒精脫色。如脫色過度,革蘭氏陽性菌也可被脫色而染成陰性菌;如脫色時間過短,革蘭氏陰性菌也會被染成革蘭氏陽性菌。脫色時間的長短還受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影響,難以嚴格規定。
 
2、染色過程中勿使染色液干涸。用水沖洗后,應吸去玻片上的殘水,以免染色液被稀釋而影響染色效果。
 
3、選用幼齡的細菌。G+菌培養12h-16h,E.coli培養24h。若菌齡太老,由于菌體死亡或自溶常使革蘭氏陽性菌轉呈陰性反應。
 
4、染色時用已知的陽性片同染作對照。

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