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全面說明分析革蘭氏染色液的原理與應用
發布時間:2019-04-09   點擊次數:1058次
     【革蘭氏染色液檢驗原理】
 
    革蘭氏染色法(Gramstain)是由丹麥醫師革蘭(Gram)氏于1884年所創立,當時發現革蘭氏陽性菌由于其細胞壁較厚,肽聚糖網層次較多且交聯致密,經革蘭氏染色后能將結晶紫與碘的復合物牢固留在壁內,不容易被脫色液脫掉而仍呈紫色,在此基礎上形成了革蘭氏染色液試劑。
 
    革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法(屬復染法),可用于標本涂片或菌落涂片,染色后細菌與環境形成鮮明對比,可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特征,從而用以臨床分類鑒定。染色結果將細菌分為革蘭氏陽性菌(紫色)和革蘭氏陰性菌(紅色)兩大類。
 
    革蘭氏染色液試劑可以縮短染色時間,通常整個染色過程只需1分鐘,而且幾乎沒有偽陰性情況發生,是目前臨床檢驗微生物實驗室的較佳選擇。
 
    【革蘭氏染色液產品用法】
 
    1.涂片經火焰固定,加(結晶紫溶液)溶液A染1分鐘,用清水沖去染液。
 
    2.加(碘液)溶液B染1分鐘,水洗。
 
    3.加(95%乙醇)溶液C,不時搖動玻片約10-30秒,至無紫色脫落為止,水洗。
 
    4.加(沙黃復染液)溶液D,染1分鐘,水洗。
 
    5.干后油鏡鏡檢。陽性菌呈紫色、陰性菌呈淡紅色。
 
    【革蘭氏染色液使用注意事項】
 
    1.該該染色液僅用于體外診斷。
 
    2.涂片厚薄要均勻,自然干燥后再加熱固定。
 
    3.復染的時間不能太長,這樣很容易將陽性菌染成陰性菌。
 
    4.所用標本應視為具有傳染性物質。
 
    5.由于液體培養基不易長期保管,現在均改制成粉末。
 
    6.培養基有天然、人工兩種革蘭氏染色液一般實驗室使用的是RPMI-1640粉末培養基,以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)調pH至7.2~7.4,若pH值超過7.6或遠低于6.8,則大多數細胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌,使用前需經滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過處理。
 
    【檢驗結果的解釋】
 
    在顯微鏡下觀察染色結果:
 
    A 在顯微鏡下觀察到紫色或深紫藍色菌落為革蘭氏染色陽性菌。
 
    B 在顯微鏡下觀察到紅色或粉紅色菌落為革蘭氏染色陰性菌。
 
    【檢驗方法的局限性】
 
    有些細菌有染色嗜變性,不一定完全是染色原因,應根據菌體形態加以確定。
 
    【革蘭氏染色液的保存】
 
    1)干粉,買了后一定要保存在4度。有人保存在-20度我認為沒有必要。但4度是非常必要的。保證期是有提示的。
 
    2)配好的無血清培養基一定保存在4度,保存不要超過3個月。用時根據提示要加入谷胺酰胺。
 
    3)加入血清的培養基,保存在4度不要超過1個月,從時間太長,活性下降。當然稍微長點也不一定出問題。但是根據細胞而定;如果原代培養,新鮮,如果是腫瘤細胞,或僅維持傳代就不太要緊,但是原則是越新越好。

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